practica 6 - bioquimica

It is a complex explanation of redox reactions and their importance in various processes, such as catalysis and phosphorylation. The speaker discusses the role of different complexes and molecules in the electron transfer process, emphasizing the importance of energy release and the gradient of electronegativity. They also mention the ability to block certain complexes using specific molecules and the competitive nature of some reactions. Overall, it is a detailed explanation of the redox mechanism in biochemical processes. Es una reducción de óxido-reducción, lo cierto es que es un redox, y eso es importantísimo porque el redox es lo que nos está diciendo, es de que un átomo o una molécula de repente puede estar en un estado oxidado o en un estado reducido, obviamente dependiendo si hay una transferencia de electrones o dependiendo si hay una transferencia de protones. Lo más conocido a veces es ver cómo un grupo funcional, por ejemplo como un aldeído, puede convertirse en un grupo carbonilo, y hablamos de una oxidación dada la pérdida de un protón en el aldeído. Pero también podríamos pensar, por ejemplo, los estados que tienen algunos metales, como el hierro, por ejemplo, que la pérdida de un electrón pasando de hierro 2 a hierro 3 que estaría pasando de un estado oxidado a un estado reducido. Y esos dos detalles son importantísimos, ¿por qué? Porque como lo vimos nosotros en algún momento, en teoría en primeros momentos, existen distintos tipos de catálisis, ¿no es cierto? Y estas catálisis también responden a un redox, en el cual un agente reductor puede de repente donarse un protón y generar un mecanismo ácido-base, tipo bronze, pero también veíamos que había en otros momentos de donde un agente reductor podría ser un metal, ¿no? Y sucede, pues, que dentro de los núcleos de las proteínas existen clústeres basados en metales, que puede de repente contener un solo metal, o puede ser el grupo M de nitrobromos, que puede ser en este caso el hierro, ¿no? O pueden ser las sincronizaciones que existen entre metales, como por ejemplo cobre-hierro, como por ejemplo cobre-azufre, ¿no? Y generar clústeres, digamos, con una estructura tridimensional definida, ¿no?, que puede, digamos, facilitar un mejor arranque o entrega de electrones, pero estaríamos hablando de una reacción ácido-base leves, ¿no? Entonces, ese estrategia es importantísimo, ¿por qué? Porque si nosotros tomamos, digamos, precisamos de que en un proceso existe un redox, ¿no?, lo que vamos a darnos cuenta es de que, obviamente, al haber un intercambio de electrones o protones, ¿no?, obviamente, como cualquier potencial redox, va a generar una liberación de energía, que hace referencia a la energía de potencial, ¿no? Y ustedes conocen muy bien por químico-física, ¿no?, de que la energía potencial, la energía potencial de un voltaje puede permitirnos multiplicar la variación de energía libre de Gibbs. ¿Por qué? Porque si hacemos un poco de matemática, tendríamos que recordar que la variación de energía libre de Gibbs es igual al número de electrones o protones que se están circulando dentro de un sistema de potencial redox multiplicado por la constante de Faraday, y esto a su vez multiplicado por la variación de energía en voltaje que genera el sistema. Entonces, ¿eso qué nos está diciendo? Que detrás de un redox se puede estimar una variación de energía libre. Y al estimar la variación de energía libre, lo que nosotros estamos entendiendo es, si una reacción es capaz de conducir o no dentro de un proceso. Y este detalle es importantísimo cuando vemos la fosforilación osciativa. ¿Por qué? Porque la fosforilación osciativa no es más que un proceso de reacciones de óxido de reducción en donde los delta de G se hacen cada vez más negativos. ¿Y eso qué propone? Eso propone de que cuando se genere un mecanismo de óxido de reducción, la dirección y de avance del mecanismo de óxido de reducción vaya del complejo 1 o del complejo 2 al complejo 3, del complejo 3 al complejo 4, y termine finitizando en donde? En el complejo 5, la TPE sin tasa. ¿No? Y más no, retornando de repente del complejo 3 al complejo 2 o del complejo 4 al complejo 3. ¿No? ¿Por qué? Porque el delta de G obtenido es cada vez mucho más negativo. Pero eso también qué nos permite entender. En este proceso hay elementos, ¿no? Probablemente, que están participando dentro del proceso. ¿No? Entonces, parte de la práctica el día de hoy es 1, demostrar la presencia de estas enzimas, pero también 2, demostrar los mecanismos de óxido de reducción. ¿No? Entonces, es importante entender que este proceso, digamos, se transmite a través de complejos. Pensando en el complejo 1, ¿no? El complejo asociado de la heterogenaza, ¿no? En donde obviamente entra a tallar el NAMP reducido. Entonces, el NAMP reducido es capaz de poder trasladar sus protones y generar un mecanismo de lanzadera propuesto por el complejo 1. O el complejo 2, que más bien recibe el succinato. Participan desde el complejo 2 también de las reacciones del ciclo de Krebs, en donde el succinato se convierte en malato. Pero en el momento en que el succinato se convierte en malato, obviamente también hay entrega de protones. ¿No? Y estos protones, ya sea del complejo 2 o del complejo 1, ¿a dónde derivan? Derivan al complejo 3. O sea, al sistema Q o a la coenzima Q. ¿Para qué? Para que la coenzima Q pueda recibir esos protones y pasar de ubiquitina a ubiquinol. ¿No? Y el ubiquinol, a su vez, trasladar esos protones, ¿a dónde? Trasladarlos al complejo 4. Pero antes de llegar al complejo 4, pasar por citocromo C, generar un melanismo óxido reductivo en el ciclo de cromo C, generar la reducción del complejo 4, y en el complejo 4 liberar los electrones que tienen que ser entregados a los sistemas para convertirlo en agua, y por ende generar una gradiente quimiotmótica que impulsará la ciencias y la teoría del complejo 5. O sea, es un mecanismo, en realidad, óxido reductivo. En donde lo único que estamos viendo es como una forma de energía basada en carga, o basada en un mecanismo de óxido reducción, está escalando, escalando y escalando a través de complejos moleculares, pero en donde en cada uno de los puntos el valor de energía libre total se va haciendo más y más y más y más negativo, generando una gradiente de electronegatividad por el ciclo 5. Que en términos bioquímicos no es la gradiente de electronegatividad que nosotros veíamos de repente cuando vemos húmedas de carbonilo. Yo veo el carbono acá y el oxígeno acá y veo que la electronegatividad va desde ese punto. ¿No? ¿Pero eso qué nos dice? De que si yo tengo una nube electrónica en ambos lados, dentro de esos dos átomos, y existe una desviación de electronegatividad semiderecha donde esté el oxígeno, quiere decir que este oxígeno tiene la capacidad de poder atraer más los electrones del mismo carbón, estabilizando la molécula. Pero eso traducido en términos bioquímicos, ¿no?, le podemos dar una interpretación flexible también. Y esta interpretación flexible implicaría, pues, de que, obviamente, al hacerse más negativo el proceso, la reacción entre el complejo 1 y el complejo 2, el complejo 2 es más negativo que el complejo 1. Si comparo el complejo 2 frente al complejo 3, el delta DG del complejo 3 es más negativo que los previos. Y si comparo la reacción del complejo 3 al complejo 4, el delta DG está aún más negativo que los complejos previos. Entonces, ¿eso qué me orienta? De que la reacción tenga solamente un solo, una sola identificación, un solo camino. Entonces, una vez que arranca la función del complejo 1 al complejo 2, como me dice la ciencia, el del ATP, es netamente obligatoria. Salvo requisito dividido de poderes, ¿no? Y ese también es un poco parte de la práctica de hoy en día. ¿No? ¿Por qué? Porque el hecho de poder también demostrar de que alguno u otro complejo está participando dentro del modelo, lo podríamos demostrar, pues, ni bien el modelo. ¿No? Entonces, imagínense, ¿no?, que de repente, ¿no?, desde Jessica hasta Diana, de repente vamos a pasar una pelota, ¿ok?, que tiene que llegar, pasar por Luis, ¿no?, pasar por Lady, ¿no?, y así, llegar a Diana, ¿no? Y nosotros queremos demostrar, ¿no?, si de repente Lady está presente en el proceso. Pero estamos así ciegas, porque yo puedo decir, pero, de repente Luis le pasa a su compañera, o de repente lo pasa directo al fondo, ¿no? ¿No? Pero ¿cómo yo determino que Lady está en el proceso? Pues, simple. Si yo sé que el expert va a favor de la variante y que va dando un paso a la vez, entonces, simple, yo bloqueo a Lady. Entonces, si yo bloqueo a Lady, Lady no va a poder pasar la pelota. Pero yo sé a quién estoy bloqueando. Pero digo, de repente, pero ya, perfecto, sé que Lady está ahí. Pero ¿cómo sé si Luis está ahí? Simple. Bloqueo a Luis. Y si yo bloqueo a Luis, la pelota ya no pasa. En este caso, en la analogía, las pelotas son los electrones, y cada uno de sus compañeros serían los complejos. Entonces, existen moléculas específicas capaces de bloquear de manera específica también a los complejos. Por ejemplo, el veneno Rotinona es capaz de bloquear al complejo 1, ¿no? Pero al mismo tiempo, dado que el complejo 2 depende de la catálisis o la conversión de succinato a malato, ¿no? ¿Qué sucede? Esta deshidrogenaza, que debe recibir a succinato para convertirlo a malato, puede generar un mecanismo competitivo también con otras moléculas, como por ejemplo, malonato. Y malonato, al competir con succinato, ocupa el sitio activo de la enzima y ahorita ya no se trata de electrones. Pero también puede competir con saracetato, porque como mencionaba hace un instante, el complejo 2 forma parte de la sierra de Crates, ¿no? ¿Y eso qué podría llevar? Podría llevar a que también el complejo 2 quede bloqueado. ¿No? Podríamos tener el complejo 3. Y dado que el complejo 3 ya presenta, está acoplado al citogromo, ¿no? Y el citogromo es susceptible de poder enlazar, digamos, carbonos que pueden tener una configuración de Cp2 o Cp3 o Cp1, ¿no? ¿No? O sea, hay que recordar esto, ¿no? Si yo tengo un memo y tengo hierro en el centro, la pregunta sería, ¿por qué ese grupo de hierro dentro de un memo es capaz de mover el oxígeno, mover el CO2, que es lo que pasa en la hemoglobina? ¿Y el por qué? Porque existe la suficiente afinidad entre ese tipo de estructura pequeña y el hierro, que se encuentra obviamente en el grupo M de la hemoglobina. Pero, ¿qué sucede? Todos los citogromos tienen derivados de M. Y tienen grupo hierro en los centros. Entonces, eso sí quiere decir que si de alguna forma alguna molécula similar logra interactuar con esta interfase, obviamente lo va a enlazar. ¿Y quiénes tienen la misma forma? Por ejemplo, la acido. Por ejemplo, el cianuro. ¿No? Razón por la cual esos complejos pueden parecer susceptibles de ser bloqueados a ese nivel. ¿No? A ese nivel. Entonces, la idea de la práctica de hoy, he mencionado algunos de los temas que vamos a estudiar, es justamente desarrollar eso. ¿No? Pero, obviamente lo vamos a diferenciar en base a muestras específicas. Por un lado, vamos a trabajar, o sea, queremos demostrar que está presente en los complejos de la planeta respiratoria. ¿En dónde, en qué órganos están presentes? En la mitocondria. ¿No es cierto? ¿Y las mitocondrias están en las células animales o en las células vegetales? ¿No? ¿Tenéis alguna muestra de planta y obtengo mitocondria? Las células animales. ¿No? Obviamente no vamos a asesinar las células animales. ¿No? Pero, ¿no? Hemos pedido que traigan un hígado. Entonces, la idea de poder disponer del hepatocito es porque el hepatocito tiene mitocondrias. Entonces, ¿qué vamos a hacer? Vamos a hacer un homogenizado de hígado. Pero ustedes conocen por las prácticas de primeros días, que yo también puedo disponer de una ración mitocondrial. O sea, separar las mitocondrias de esa mezcla compleja. Entonces, ¿qué vamos a hacer? ¿No? Y es un poco lo que se está haciendo ahorita. Por eso decía que estamos avanzando. Ya se está fraccionando. ¿Para qué? ¿Para qué se ha homogenizado? ¿No? Primero, así lo he llevado a 3500 revoluciones. Y ustedes conocen muy bien que si llevamos ese centrifugado a 3500 revoluciones estamos generando 1000 G, 1000 gravedades. Y con 1000 gravedades, ¿qué obtengo? Fracción nuclear, fracción mitocondrial o fracción microsomal. 1000 gravedades. ¿Qué fracción? Fracción nuclear, exacto. Ahora, si cojo el sobrenadante de esa fracción nuclear y lo llevo a 10000 gravedades, ¿qué obtengo? ¿Mitocondrial o microsomal? Mitocondrial, exacto. Y el sobrenadante de eso sería la fracción microsomal. Entonces lo que se está haciendo ahorita es llevar a 3500 revoluciones esta centrífuga, ¿no? Para poder obtener la fracción nuclear y luego con el sobrenadante se va a llevar a centrifugar en una centrífuga que tenemos en otro ambiente. Esa centrífuga va a rotar a 7500 revoluciones que nos va a permitir llegar aproximadamente entre 8 a 10000 gravedades, lo que nos va a permitir obtener una fracción mitocondrial, ¿no? Y con el remanente estaríamos nosotros también proporcionando lo que es la fracción microsomal, ¿de acuerdo? Entonces, obviamente, el homocesizado contiene mitocondriosis, ¿no es así? Entonces obviamente vamos a poder ver reacciones de oxiorreducción, ¿cierto? Claro. Pero, ¿en qué otra fracción esperaríamos también reacciones de oxiorreducción? ¿En la nuclear, en la microsomal o en la mitocondrial? ¿En la mitocondrial? Pues por lógica, ¿no? O sea, las entidades de oxiorreducción están en la mitocondria, entonces debería estar ahí, claro, ¿no? Entonces hay que tomar en cuenta esa diferencia. ¿Pero vos dices que el sistema no puede cambiar el... ¿Cambiar? ¿...el sistema de oxiorreducción? Ahorita vamos. Listo, chicos. Entonces, según el protocolo que está en sus líneas de práctica, vayan preparando un cuchillito, vayan rotulándolo, ¿sí? Y ahorita le vamos a... ¿De acuerdo? Ya está. ¿Tiene que ser el mismo protocolo, o...? Claro, son dos prácticas, pero la verdad es que... ...es un tránsito de vivencia. ¿Ok? Ahí está. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? No. ¿Tienes cuchillo? 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